干旱区生态环境知识资源中心(Arid): 梭梭原生质体快速制备方法的建立及其在亚细胞定位中的应用

Arid

	梭梭原生质体快速制备方法的建立及其在亚细胞定位中的应用
其他题名	Establishment of Rapid Protoplast Preparation Method for Haloxylon ammodendron and Its Application in Subcellular Localization
	黄长福; 黄丽燕; 阿不都克玉木·米吉提; 罗艳丽; 麻浩
来源期刊	基因组学与应用生物学
ISSN	1674-568X
出版年	2020
卷号	39 期号:5 页码:2207-2215
中文摘要	梭梭是中国西北荒漠半荒漠地区防沙治沙首选建群树种。目前梭梭蛋白亚细胞定位采用洋葱表层细胞以及鹰嘴豆和拟南芥原生质体等进行,但采用不同体系进行亚细胞定位,可能会出现不同结果,这与同源或异源表达的植物细胞特性有关。因此,梭梭蛋白采用其原生质体进行亚细胞定位结果更真实可信。通过对酶种类及配比、质壁分离时间、酶解液pH、酶解时间等的优化,本研究拟建立梭梭原生质体快速制备方法,并探讨其在亚细胞定位中的应用。结果表明:以2~3 cm长的幼嫩同化枝,置于pH值5.6的CPW酶解液(10%甘露醇, 0.1% MES, 1.0%纤维素酶, 0.4%离析酶)中,黑暗条件下27℃恒温水浴45 r/min酶解10~11 h,为梭梭原生质体快速制备最佳条件,原生质体产量可达0.41*10~7个/g·FW,存活率为70.32%;所得原生质体应用于亚细胞定位研究效果良好。本制备方法可应用于梭梭原生质体培养、细胞研究、基因瞬时表达等领域。
英文摘要	Haloxylon ammodendron is the first choice tree species for desertification control in the desert and semi desert areas of Northwest China. The subcellular localization of H. ammodendron proteins was currently conducted using the surface cells of onion and the protoplasts of chickpea and Arabidopsis. However, subcellular localization with different systems may result in different results, which are related to the characteristics of plant cells that are homologous or heterologous expressed. The results of subcellular localization of H. ammodendron protein using its protoplasts are more authentic. Through the optimization of the types and ratios of enzyme, separation times of mass-wall, pH values of enzymatic hydrolysate and times of enzymatic hydrolysis, the aims of this research are to establish the method of rapid protoplast preparation for H. ammodendron and to explore its application in subcellular localization. The rapid preparation of the best conditions was that 2 to 3 cm long young assimilating branches were placed in the CPW enzyme hydrolysate (containing 10% mannitol, 0.1% EMS, 1.0% cellulose, and 0.4% macerozyme, pH 5.6) and shook in a constant temperature bath (27℃ at 45 r/min for 10 to 11 h in dark. Under the condition, the protoplast yield could reach to 0.41*10~7·g~(-1)·FW~(-1), with a survival rate of 70.32%. Our results indicated that the application of the harvested protoplasts to subcellular localization was effective.
中文关键词	梭梭 ; 原生质体 ; 分离体系 ; 优化和建立 ; 亚细胞定位 ; 应用
英文关键词	Haloxylon ammodendron Protoplast Separation system optimization and establishment Subcellular localization Application
类型	Article
语种	中文
收录类别	CSCD
WOS研究方向	Forestry
CSCD记录号	CSCD:6769423
来源机构	新疆农业大学
资源类型	期刊论文
条目标识符	http://119.78.100.177/qdio/handle/2XILL650/336718
作者单位	黄长福, 新疆农业大学草业与环境科学学院;;新疆农业大学草业与环境科学学院, 干旱区荒漠研究所, ;;, 乌鲁木齐;;乌鲁木齐, ;; 830052;;830052.; 罗艳丽, 新疆农业大学草业与环境科学学院;;新疆农业大学草业与环境科学学院, 干旱区荒漠研究所, ;;, 乌鲁木齐;;乌鲁木齐, ;; 830052;;830052.; 黄丽燕, 南京农业大学农学院, 南京, 江苏 210095, 中国.; 阿不都克玉木·米吉提, 新疆农业大学草业与环境科学学院, 干旱区荒漠研究所, 乌鲁木齐, 新疆 830052, 中国.; 麻浩, 新疆农业大学草业与环境科学学院;;新疆农业大学草业与环境科学学院, 干旱区荒漠研究所;;南京农业大学农学院, ;;;;, 乌鲁木齐;;乌鲁木齐;;南京, ;;;; 830052;;830052;;210095.
推荐引用方式 GB/T 7714	黄长福,黄丽燕,阿不都克玉木·米吉提,等. 梭梭原生质体快速制备方法的建立及其在亚细胞定位中的应用[J]. 新疆农业大学,2020,39(5):2207-2215.
APA	黄长福,黄丽燕,阿不都克玉木·米吉提,罗艳丽,&麻浩.(2020).梭梭原生质体快速制备方法的建立及其在亚细胞定位中的应用.基因组学与应用生物学,39(5),2207-2215.
MLA	黄长福,et al."梭梭原生质体快速制备方法的建立及其在亚细胞定位中的应用".基因组学与应用生物学 39.5(2020):2207-2215.