Knowledge Resource Center for Ecological Environment in Arid Area
| 沙漠小球藻转人乳铁蛋白表达系统的优化 | |
| 汪文伦 | |
| 出版年 | 2016 |
| 学位类型 | 硕士 |
| 导师 | 高剑峰 |
| 学位授予单位 | 石河子大学 |
| 中文摘要 | 目的:构建人乳铁蛋白的沙漠小球藻GTD8A1表达系统,以获得转基因藻种GTD8A1-HLF;优化植物表达载体的电转化条件(电压、培养周期、渗透剂浓度、质粒浓度、渗透处理时间、电击缓冲液浓度),以增加阳性克隆率和细胞成活率;优化产物条件(p H、C、N、P、Na Cl、Mg、Fe、Zn、B和Cu),以提高转基因藻种GTD8A1-HLF表达人乳铁蛋白含量。为人乳铁蛋白的产业化和商业化提供上游试验藻种和生产工艺条件。方法:(1)构建p CAMBIA2300-35S-GFP-HLF-OCS表达载体,以人乳铁蛋白基因作为电转优化的参考基因,首先采用单因素试验确定转染的转化条件,然后进行电转化正交试验,得到最优的电转化条件。(2)构建p CAMBIA2300-35S-HLF-OCS表达质粒载体,将重组质粒电击转入沙漠小球藻GTD8A1细胞中,通过SDS-PAGE和Western Blot对蛋白进行分析,从而获得转基因藻种GTD8A1-HLF。(3)通过单因素试验确定Plackett-Burman(PB)试验的上下限,然后进行Central Composite Design(CCD)试验,通过RT-PCR和ELISA技术测定在不同培养条件下转基因藻种GTD8A1-HLF的人乳铁蛋白含量,从而获得最适培养条件。结果与结论:1.通过电转优化试验结果表明:最优电转化条件是电压1400V、培养周期8天、渗透剂浓度0.2mol/L、渗透时间为0小时、质粒浓度为6mg/m L、电击缓冲液浓度为0.4mol/L,其细胞致死百分率为51.30%、荧光百分率为52.54%、PCR阳性平均百分率为42.30%。2.试验结果表明:将人乳铁蛋白基因(HLF)电转进入到沙漠小球藻细胞中,通过菌落PCR鉴定后并在相同抗性的液体培养基中扩大培养,基因组DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录,SDS-PAGE和Western Blot分析获得70k Da的目的蛋白;结果表明人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统构建成功。3.通过产物优化试验结果表明:最适培养条件为NaCO_3浓度为0.1mol/L、K_2HPO_4浓度为0.02mol/L、NaCl浓度为0.01mol/L、MgSO_4浓度为0.03mol/L、CuSO_4浓度为0.002mol/L、H_3BO_3浓度为0.02mol/L、NaNO_3浓度为0.6mol/L、FeSO_4浓度为0.006mol/L、ZnSO_4浓度为0.002mol/L时,人乳铁蛋白的产量达到51.65 mg/L |
| 中文关键词 | 小球藻 ; 人乳铁蛋白 ; SDS-PAGE和Western Blot ; 电转化 ; ELISA和RT-PCR ; 细胞致死率 ; 荧光百分率 |
| 语种 | 中文 |
| 国家 | 中国 |
| URL | http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=1016778587.nh&DbName=CMFD2017 |
| 来源机构 | 石河子大学 |
| 资源类型 | 学位论文 |
| 条目标识符 | http://119.78.100.177/qdio/handle/2XILL650/256837 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 汪文伦. 沙漠小球藻转人乳铁蛋白表达系统的优化[D]. 石河子大学,2016. |
| 条目包含的文件 | 条目无相关文件。 | |||||
| 个性服务 |
| 推荐该条目 |
| 保存到收藏夹 |
| 导出为Endnote文件 |
| 谷歌学术 |
| 谷歌学术中相似的文章 |
| [汪文伦]的文章 |
| 百度学术 |
| 百度学术中相似的文章 |
| [汪文伦]的文章 |
| 必应学术 |
| 必应学术中相似的文章 |
| [汪文伦]的文章 |
| 相关权益政策 |
| 暂无数据 |
| 收藏/分享 |
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。
