干旱区生态环境知识资源中心(Arid): 豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化

Arid

	豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化
其他题名	EXPRESSION AND PURIFICATION OF SUBTILISIN DFE (DOUCHI FIBRINOLYTIC ENZYME) GENE IN PICHIA PASTORIS
	张仁怀 1; 王海燕 1; 谈宁馨 2; 张风豪 1; 张义正 1
来源期刊	应用与环境生物学报
ISSN	1006-687X
出版年	2005
卷号	11 期号:5 页码:623-626
中文摘要	将含有和不含前肽的豆豉溶栓酶编码序列在毕赤酵母中分别进行表达研究,发现在含有前肽的豆豉溶栓酶基因转化的毕赤酵母工程菌用甲醇诱导时,其培养液中可检测到较强的溶栓酶活性;而在不含前肽的豆豉溶栓酶基因转化的毕赤酵母菌用甲醇诱导时,培养液中未检测到溶栓酶活性.对毕赤酵母表达和分泌的豆豉溶栓酶进行了分离纯化,并对其纯化产物进行溶栓酶活性、SDS-PAGE电泳、抑制剂作用及免疫印迹分析.结果表明,分泌到培养液中的豆豉溶栓酶已经过剪切加工,其前肽已被切除,重组与天然的豆豉溶栓酶具有相同的溶栓酶活性,其所测定的各理化指标均一致.本研究实现了豆豉溶栓酶在毕赤酵母菌中成功表达,并首次直接证明了前肽对豆豉溶栓酶在毕赤酵母中分泌表达是必须的.
英文摘要	The gene coding for a novel fibrinolytic enzyme, subtilisin DFE (douchi fibrinolytic enzyme) from Bacillus amyliquefaciens, was previously reported and its intact coding region was also identified. In this study, the recombinant plasmids expressing pro-subtilisin DFE, and subtilisin DFE were first constructed and transformed into Pichia pastoris. Strong fibrinolytic activity was detected only in the culture supernatant of the methanol induced pro-subtilisin DFE-transformants, but not in that of the other kinds of Iransformanls. This result implied that the pro-peptide was important for the secretion of suhtilisin DFK in P. pastoris, arid after secretion, the pro-peptide was subsequently removed to produce active mature subtilisin DFK. The recombi-nanl subtilisin DFK was purified to homogeneity Irom llie culture supernatant ol the induced /’. pastoris Iransformant by three-step chromatography. The results from fibrinolytic activity, SDS - PACK and Western-blotting analysis showed that the purified recombinanl sublilisin DFK was the same as its native lorm.
中文关键词	豆豉溶栓酶 ; 基因表达 ; 毕赤酵母 ; 前肽 ; 纯化
英文关键词	subtilisin DFE （douchi fibrinolytic enzyme） gene expression Pichia pastoris pro-peptide purification
语种	中文
国家	中国
收录类别	CSCD
WOS类目	GENETICS HEREDITY ; FOOD SCIENCE TECHNOLOGY
WOS研究方向	Genetics & Heredity ; Food Science & Technology
CSCD记录号	CSCD:2044868
资源类型	期刊论文
条目标识符	http://119.78.100.177/qdio/handle/2XILL650/206850
作者单位	1.四川大学生命科学学院, 四川省分子生物学及生物技术重点实验室, 成都, 四川 610064, 中国; 2.四川大学化工学院, 成都, 四川 610065, 中国
推荐引用方式 GB/T 7714	张仁怀,王海燕,谈宁馨,等. 豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化[J],2005,11(5):623-626.
APA	张仁怀,王海燕,谈宁馨,张风豪,&张义正.(2005).豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化.应用与环境生物学报,11(5),623-626.
MLA	张仁怀,et al."豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化".应用与环境生物学报 11.5(2005):623-626.